技術摘要

鹿茸萃取物藥渣廢棄物再利用，使用特別之水解技術，具有獨特之技術特徵，及特定之功能性展現。

現有技術描述、問題及其缺陷

先前研究指出鹿茸萃取液具有調節過敏、預防骨質疏鬆、護肝及抗疲勞等功效，但是萃取後所剩下的副產物無法被利用或是回收，不僅造成浪費，也會對於環境造成污染。

科學突破

一、試驗方法 1. 依照台灣鹿茸精萃液副產物，再進行微生物降解，再依照不同分子量區分分劃分離萃取，分子篩範圍為3K以下、3K-10K、10K-30K、30Ｋ以上等四個分劃，並依照區段進行萃取純化。 Table 1. 微生物水解鹿茸精萃液副產物完成分劃產率 項次 微生物水解鹿茸精萃液副產物 產率 1 Bacillus subtilis (Bs) 4.34 ± 0.71% 2 B. mesentericus (Bm) 3.72 ± 0.49% 3 Lactobacillus planetarium (Lp) 5.27 ± 0.33% 4 L. rhamnosus (Lr) 4.73 ± 0.65% Table 2. 微生物水解產物不同分子量分劃的區分 % <3K 3-10K 10-20K 20K> Bs 42.3 32.1 10.7 14.9 Bm 57.2 30.9 3.4 8.5 Lp 63.2 24.1 2.4 10.3 Lr 41.3 40.7 5.4 12.6 2. 試驗動物購自樂斯科生物科技股份有限公司 實驗動物中心。選用≧6月齡之多產淘汰雌性BALB/c小白鼠。飼養在恆溫（22 ± 2°C）、亮暗各12小時之動物房。飼養或處理時應避免動物驚嚇，且每次必須前後一致。 (1).      對照組：正常飼料，無進行手術，餵食無菌逆滲透水 10 ml/kg (2).      試驗組：正常飼料，進行骨創傷微創手術，餵食無菌逆滲透水 10 ml/kg。 (3).      LpL：正常飼料，進行骨創傷微創手術，餵食鹿茸副產物微生物水解產物 50 mg/kg。 (4).      LpH：正常飼料，進行骨創傷微創手術，餵食鹿茸副產物微生物水解產物  250 mg/kg。 (5).      VAb：正常飼料，進行骨創傷微創手術，餵食鹿茸副產物50 mg/kg。 3. 小鼠股骨創傷微創手術，以齒科電鑽進行小鼠股骨微鑽孔手術(0.5 mm)，經縫合後餵食不同試驗物質，經兩週後犧牲。 Table 3. 試驗動物體重與臟器重量變化： 週數 動物數 Naïve Control LpL, 50 mg/kg LpH, 250 mg/kg VAb, 70 mg/kg 體重(g) 試驗前 6 29.4 ± 7.6 26.8 ± 2.2 26.9 ± 3.8 27.6 ± 2.4 27.1 ± 2.2 犧牲 6 28.1 ± 6.9 27.3 ± 2.0 25.7 ± 2.5 26.3 ± 2.0 25.0 ± 2.0 心 6 0.158 ± 0.016 0.158 ± 0.020 0.149 ± 0.025 0.182 ± 0.075 0.156 ± 0.028 肝 6 1.184 ± 0.189 1.518 ± 0.793 1.119 ± 0.118 1.248 ± 0.152 1.181 ± 0.155 脾 6 0.116 ± 0.012 0.364 ± 0.586 0.105 ± 0.023 0.125 ± 0.038 0.096 ± 0.021 腎 6 0.348 ± 0.054 0.377 ± 0.054 0.345 ± 0.026 0.362 ± 0.046 0.334 ± 0.034 子宮卵巢 6 0.296 ± 0.103 0.424 ± 0.121 0.409 ± 0.185 0.335 ± 0.080 0.309 ± 0.045 腿骨 6 0.079 ± 0.011 0.081 ± 0.008 0.078 ± 0.008 0.080 ± 0.011 0.085 ± 0.010 4. 骨髓細胞M1/M2細胞免疫染色分化變化 (1).      淋巴細胞分型為評估免疫組織，包括脾臟與植入材料周邊淋巴結等免疫細胞分化之變化，具有評估免疫過度反應抑制之抗原表現與活化之免疫抗原指標。細胞經單離懸浮於培養液後，調整細胞數為1×107，取樣5×105細胞以CD68, CD197, CD206等抗體標定染色，經染色後以流式細胞分析儀(FACS)分析M1 (CD68+CD197+)及M2 (CD68+CD206+)等細胞。 (2).      骨髓細胞鹼性磷酸酶 (Bone marrow alkaline phosphatase, BALP)染色變化：以Alkphase-B kit進行ELISA分析。微量滴盤上附著有一層抗骨源鹼性磷酸酶之單株抗體（Monoclonal anti-ALP antibody），加入血清ALP與之形成專一性鍵結，再加入p-Nitrophenyl phosphate（pNPP）作為受質，ALP水解 pNPP使呈黃色反應。黃色越深表示血清中含有越多的骨源鹼性磷酸酶，於波長405nm下讀取的吸光值亦越大，將實驗組吸光值帶入標準曲線方程式，經換算獲得ALP濃度（U/L） 5. 組織切片染色 (1).      骨組織H&E病理切片分析：組織切片用來評估植入材料與組織以石蠟包埋後切片(5 μM)，以蘇木紫/伊紅染色法染色，經脫水封片後，於100×光學顯微鏡下觀察細胞附著與生長分布並拍照紀錄。 (2).      骨組織鹼性磷酸(ALP)染色變化：使用Alkaline phosphatase (ALP) stain kit，先將骨切片固定，靜置30秒後吸除固定液，再用400 μL的去離子水清洗，靜置45 秒後吸除上清液，之後加入200 μL的鹼性磷酸酵素染液，在室溫下避光靜置15 分鐘。15分鐘後吸除染液，同樣用400 μL的去離子水清洗，靜置2分鐘 後吸除上清液，最後用10 μL實驗組中所附的Hematoxylin Solution做對 比共染，1分鐘後吸除對比染液，將24孔培養盤移至水槽中，用自來水輕輕的小心沖洗染液，之後靜置風乾，於倒立式顯微鏡下觀察細胞形態變化並照相。

產業應用性

寵物保健食品添加劑原料

本技術發明之目的及達成功效

本發明係透過特殊水解製程自鹿茸萃取後之廢棄物中獲得功效性成份，並且能將之功效性成份製成機能性食品，用以促進骨創傷修復，以有效地達到回收再利用食物廢棄物之功效。

相關專利資訊

本發明係提供一種鹿茸萃取副產物水解物之製備方法及其用途，具體來說，該鹿茸萃取副產物水解物係由鹿茸萃取副產物經一益生菌進行水解所得者，具有降低骨細胞發炎、促進骨細胞增生、修復骨細胞等活性，據此，藉由投予有效量之本發明所揭鹿茸萃取副產物水解物至一個體，係能有效地達到治療或預防骨損傷相關疾病、促骨質生長、治療骨發炎之功效。

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